Кожные пробы на аллергию. Виды. Побочные эффекты

Тема № 2: иммунитет: виды иммунитета, неспецифические факторы защиты.

Скарификационные пробы применяются в традиционной медицине уже достаточно давно, но по-прежнему остаются одними из самых достоверных. Процедуру проводят так:

  • кожу на внутренней стороне руки протирают дезинфицирующим раствором (от запястья до локтевого сгиба);
  • пробы вероятных раздражителей по капле наносят на кожу руки;
  • под каждой каплей слегка царапают кожный покров при помощи специального металлического скарификатора (инструмент одноразовый, стерильный);
  • просят пациента на протяжении 20 минут держать руку неподвижно, чтобы капли проб не растеклись и не перемешались между собой.

По завершении этого времени доктор определяет, на какой из проб появилась реакция в виде волдыря или изменения цвета кожи.

Примерно по такой же технологии проводят прик-тесты. Разница состоит лишь в том, что после нанесения тестовых капель кожу на руке не царапают, а делают прокол иглой.

Самый современный и неинвазивный из существующих методов кожных тестов — аппликация. Для нее используются готовые диагностические средства с уже нанесенными аллергенами. На каждой из полосок может размещаться до десяти различных аллергенов.

Проба проводится так:

  • очищают большой участок кожи (чаще всего на спине) и наклеивают на него тестовые полоски при помощи липкой ленты;
  • пробы нельзя снимать в течение двух дней (душ принимать тоже нельзя);
  • по истечении 48 часов полоски снимают и оценивают результаты проб.

Презентация на тему "Организация микробиологической лаборатории ...

Но не всегда для эффективной диагностики требуется столь длительное время, все зависит от аллергена. После расшифровки как первичных, так и поздних проб пациенту выдают бланк с результатами, на котором возле каждого вероятного аллергена должно стоять:

  • положительный;
  • слабоположительный;
  • сомнительный;
  • отрицательный.

Каждое исследование может включать в себя выявление реакции организма на 10-15 аллергенов. При проведении количественной пробы (определения степени восприимчивости к определенному типу раздражителя) возможно использование одного и того же вещества, но в разных концентрациях.

//proallergiju.ru/www.youtube.com/watch?v=LeIXh6NOBck

Для более точной постановки диагноза современные медицинские методики позволяют определить антитела к возбудителю по результатам специального анализа крови в дополнение к кожным пробам.

Критерий
метода

Методы

  1. Подход

Генотипические:

ПЦР

ПЦРПДРФ

ДНКгибридизация

секвенирование

Фенотипические:

диффузионные
методы (диско-диффузионный)

методы разведений
(в агаре, в бульоне)

комбинированные
(Е-тест)

  1. Быстрота
    получения результатов

Ординарные
(обычные)

Ускоренные

Автоматизированные

Цель:
изучить
строение иммунной системы организма
человека, строение и функции
иммунокомпетентных клеток, изучить
виды иммунитета и неспецифические
факторы защиты организма.
Познакомиться с основными этапами
филогенеза и онтогенеза иммунной системы

Вопросы
для самоподготовки:

  1. Виды
    невосприимчивости макроорганизма к
    возбудителям инфекционных заболеваний
    (врожденная и приобретенная
    невосприимчивость, видовая
    невосприимчивость, естественная
    резистентность, иммунитет: естественный
    и искусственный, активный и пассивный).

  2. Видовая
    невосприимчивость к возбудителям
    инфекционных болезней и ее механизмы.

  3. Физиологические
    (барьерная функция покровов, антимикробное
    действие секретов, вы­ведение микробов
    физиологическими путями, антагонистическое
    действие нормальной микрофлоры,
    барьерная и адсорбционная функция
    тканей, действие тканевых ингибито­ров,
    фагоцитоз, антимикробное действие
    лизоцима, комплемента, интерфероны и
    др.) механизмы неспецифической
    резистентности

  4. Механизм
    фагоцитоза. Макро- и микрофаги, их
    функциональные отличия. Завершен­ный
    и незавершенный фагоцитоз.

  5. Комплемент.
    Пути активации.

6.
Патофизиологи­ческие (стресс,
воспалительная реакция) механизмы
неспецифической резистентности

8.
Иммунная система организма. Центральные
и периферические органы иммунной
системы.

9.
Филогенез и онтогенез иммунной системы.

10.
Иммунокомпетентные клетки. Клеточные
и гуморальные механизмы иммунитета (Т
и В системы).

Программа:

  1. Иммунитет,
    виды и формы иммунитета.

  2. Неспецифические
    факторы защиты.

  3. Фагоцитоз.

  4. Система
    комплемента.

  5. Воспалительная
    реакция.

  6. Интерфероны.


7.
Иммунная система организма

8.Филогенез
и онтогенез иммунной системы

9.
Иммунокомпетентные клетки

1. Схемы
и таблицы с механизмами неспецифического
иммунитета.

2.
Микропрепарат незавершенного фагоцитоза
гонококков.

1. Зарисовать
схемы механизмов активации комплемента.

2. Зарисовать
схему действия интерферонов.


3.Поставить
Опыт действия лизоцима на различные
виды микробов

4.Изучить
микропрепарат незавершенного фагоцитоза
гонококков. Зарисовать.

5.Заполнить
таблицу:
Особенности строения и функций
иммунокомпетентных клеток

6.Заполнить
таблицу:
Эволюция иммунной системы

Иммунитет
(от лат. immunitas — неприкосновенный,
находящийся под защитой, освобождение,
избавление от болезни) — это система
биологической защиты внутренней среды
многоклеточного организма (гомеостаза)
от генетически чужеродных веществ
экзогенной и эндогенной природы.

• ареактивность
клеток макроорганизма
к патогенным микроорганизмам и токсинам,
обусловленную генотипом и связанную с
отсутствием на поверхности таких клеток
рецепторов для адгезии патогенного
агента;


• барьерная
функция кожи и слизистых оболочек,
которая обеспечивается отторжением
клеток эпителия кожи и активными
движениями ресничек мерцательного
эпителия слизистых оболочек. Кроме
того, она обусловлена выделением
экзосекретов потовых и сальных желез
кожи, специфических ингибиторов,
лизоцима, кислой средой желудочного
содержимого и другими агентами.

Кожные пробы на аллергию - MedExplorer - информационный сайт о ...

Биологические факторы защиты на этом
уровне обусловлены губительным
воздействием нормальной микрофлоры
кожи и слизистых покровов на патогенные
микроорганизмы;

• температурная
реакция,
при которой прекращается размножение
большинства патогенных бактерий.

• клеточные
и гуморальные факторы
организма.

Классификация методов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Цель:
Изучить основные иммунобиологические
препараты, их особенности, получение и
применение в медицине. Получить
представление о принципах приготовления
диагностических препаратов, меченых
флюорохромами, радиоактивными элементами,
ферментами; чувствительности отдельных
иммунных
реакций и областях их применения..

Основные
вопросы, разбираемые на занятии:

  1. Вакциопрофилактика
    и вакцинотерапия.

  2. Состав
    и классификация вакцин.

  3. Живые
    вакцины, получение и применение.

  4. Инактивированные
    вакцины, получение и применение.

  5. Синтетические
    и полусинтетические вакцины, получение
    и применение.

  6. Ассоциированные
    вакцины.

  7. Календарь
    профилактических прививок.

  8. Серопрофилактика
    и серотерапия.

  9. Сывороточные
    иммунные препараты.

  10. Получение
    и применение моноклональных антител.

  11. Иммуномодуляторы.

  12. Реакции
    с мечеными диагностическими компонентами
    (ИЛМ, РИФ, ИФА, РИА, иммуноблоттинг).

План

Программа

1.
Состав и классификация вакцин


2.
Сывороточные иммунные препараты, состав
и классификация.

3.Иммуномодуляторы

4.
Реакции с мечеными диагностическими
компонентами

Демонстрации.

1.
Вакцинные иммунобиологичские препараты,
применяемые в РФ.

2.
Сывороточные иммунобиологические
препараты, применяемые в РФ

3.
Схема получения моноклональных антител

Аллергические пробы и астма — ЗдоровьеИнфо


4.
Иммуноферментные тест-системы

Задание
студентам

1.
Заполнить таблицу:
Классификация вакцин

2.
Определить, к какой группе вакцин
относится выданный иммунобиологический
препарат, рассказать о способе его
получения, дать характеристику
иммунитета, индуцированного этим
препаратом

3.
Определить, к какой группе сывороточных
препаратов относится выданный
иммунобиологический препарат, рассказать
о способе его получения, дать характеристику
иммунитета, индуцированного этим
препаратом.

4.
Зарисовть схему получения моноклональных
антител

Информационный
материал.

Иммуно-люминесцентный
метод
(ИЛМ, РИФ)
Метод флуоресцирующих антител
(МФА,
иммунофлуоресценция)
(англ. Immunofluorescence) —
лабораторный иммунологический метод
качественного определения антигена
по известному глобулину
или антител
по известному антигену.

Сущность
и классификация МФА

Сущность
метода флюоресцирующих антител
заключается в визуализации реакции
антиген-антитело люминесцентными
маркерами. Метод конъюгации глобулинов
с органическими флюорохромами разработан
в 1942 году А.
Кунсом.

Различают
МФА прямой,
разработанный А. Кунсом и Мелвином
Капланом, МФА непрямой,
разработанный А. Кунсом и Уиллером и
непрямой
МФА с
комплементом.

При
прямом методе (пМФА)
на препарат с антигеном наносят известную,
предположительно соответствующую ему,
люминесцирующую сыворотку. В случае
образования комплекса, он обнаруживается,
люминесцентной микроскопией в виде
зеленоватого свечения разной степени
интенсивности и четкости.

При
непрямом методе (нМФА)
на мазок из наслоения антигена и немеченой
сыворотки наносят антиглобулиновую
(видовую по отношению к диагностической
сыворотке) люминесцирующую сыворотку.
В случае образования комплекса
антиген-антитело, последний компонент
реагирует с видовой антиглобулиновой
люминесцирующей сывороткой.

При нМФА
с комплементом, его добавляют к комплексу
антиген-антитело и идентифицируют
образование тройного комплекса по
люминесцирующей антикомплементарной
сыворотке.

Результаты
описываются в так называемых «крестах»
(от одного до четырех ) — субъективная
градация исследователем степени
выраженности реакции. Непрямые методы
требуют наличия только антиглобулиновых
видовых сывороток с флюорохромами, но
при этом необходимо большое количество
тестовых контролей.

При постановке
прямым методом делается только один
контроль, но требуется множество
моноспецифических сывороток. Недостатками
всех видов МФА является ограниченная
чувствительность из-за наличия возможных
перекрестных реакций между близкими
по антигенному составу объектами и
неспецифическая флуоресценция вследствие
адсорбции флуоресцирующих глобулинов
на различных элементах препарата.

В
настоящее время используются коммерческие
стандартные конъюгаты, содержащие
глобулины к исследуемым антигенам.
Метод флуоресцирующих антител .

Иммуноферментный
анализ
(сокращённо ИФА,
(англ.  enzyme-linked
immunosorbent assay, ELISA) —
лабораторный иммунологический метод
качественного или количественного
определения различных соединений,
макромолекул, вирусов и пр.

, в основе
которого лежит специфическая реакция
антиген-антитело.
Выявление образовавшегося комплекса
проводят с использованием фермента в
качестве метки для регистрации сигнала.

Сущность
и классификация

Из-за
разнообразия объектов исследования —
от низкомолекулярных соединений до
вирусов и бактерий, и многообразия
условий проведения ИФА существует
большое количество вариантов этого
метода.

Возможна
классификация по типу иммунохимического
взаимодействия на первой стадии анализа
(в которой происходит связывание
определяемого вещества). Если в системе
присутствуют только анализируемое
соединение и соответствующие ему центры
связывания (антиген и специфические
антитела),
то метод является неконкурентным.

Если же на первой стадии в системе
одновременно присутствует анализируемое
соединение и его аналог (меченное
ферментом анализируемое соединение
или анализируемое соединение,
иммобилизованное на твердой фазе),
конкурирующие за ограниченное количество
центров специфического связывания, то
метод является конкурентным.

Примером
неконкурентного
формата ИФА является «сэндвич»-метод.
К носителю с иммобилизованными антителами
добавляют раствор, содержащий анализируемый
антиген.

В процессе инкубации на первой
стадии на твердой фазе образуется
комплекс антиген-антитело. Затем носитель
отмывают от несвязавшихся компонентов
и добавляют меченные ферментом
специфические антитела.

После вторичной
инкубации и удаления избытка конъюгата
антител с ферментом определяют
ферментативную активность носителя,
которая пропорциональна начальной
концентрации исследуемого антигена.
На стадии выявления специфического
иммунокомплекса антиген оказывается
как бы зажатым между молекулами
иммобилизованных и меченных антител,
что послужило поводом для широкого
распространения названия «сэндвич»-метод.

Ферментативная
реакция (цветная реакция) проходит в
присутствии перекиси водорода и
субстрата, представленного неокрашенным
соединением, которое в процессе
пероксидазной реакции окисляется до
окрашенного продукта реакции на
заключительном этапе проведения
исследования.

Интенсивность окрашивания
зависит от количества выявленных
специфических антител. / Результат
оценивается спектрофотометрически
или визуально.

«Сэндвич»-метод
может быть использован для анализа
только тех антигенов, на поверхности
которых существуют, по крайней мере,
две антигенные детерминанты. На этом
формате основано большое количество
тест-систем для иммуноферментной
диагностики различных инфекций:
ВИЧ-инфекция,
вирусные гепатиты,
цитомегаловирусная,
герпесная,
токсоплазменная и другие инфекции.


Среди
конкурентных
схем твердофазного ИФА существует два
основных формата:

  1. Прямой
    конкурентный
    формат ИФА использует иммобилизованые
    на твердой фазе специфические антитела,
    а меченый ферментом и немеченыйантиген
    конкурируют за связь с иммобилизованным
    антителом.
    К
    иммобилизованным антителам добавляют
    раствор, содержащий определяемое
    вещество и фиксированную концентрацию
    меченого антигена, инкубируют и после
    отмывки носителя от несвязавшихся
    компонентов регистрируют ферментативную
    активность образовавшихся на твердой
    фазе специфических иммунных комплексов.
    Величина детектируемого сигнала
    находится в обратной зависимости от
    концентрации антигена.
    Преимуществом
    прямой схемы является небольшое число
    стадий, что позволяет легко автоматизировать
    анализ. К недостаткам схемы относятся
    сложность методов синтеза ферментных
    конъюгатов, а также возможное влияние
    компонентов образца на активность
    фермента.

  2. В
    непрямом
    конкурентном
    формате ИФА используются меченные
    ферментом антитела
    (специфические или вторичные) и
    иммобилизованный на твердой фазе
    конъюгат антиген-белок-носитель.
    Непрямая
    схема с использованием меченых
    антивидовых антител является одной из
    наиболее распространенных схем ИФА.
    На поверхности носителя иммобилизуют
    конъюгат антиген-белок,
    к которому добавляют раствор, содержащий
    определяемый антиген
    и фиксированную концентрацию немеченых
    специфических антител, инкубируют и
    после удаления несвязавшихся компонентов
    добавляют фиксированную концентрацию
    меченых антивидовых антител. После
    инкубации и отмывки носителя детектируют
    ферментативную активность образовавшихся
    на твердой фазе специфических иммунных
    комплексов, причем величина сигнала
    находится в обратно-пропорциональной
    зависимости от концентрации определяемого
    антигена.

    Применение универсального реагента —
    меченых антивидовых антител — даёт
    возможность выявлять антитела к разным
    антигенам. Кроме того, анализируемый
    образец и меченый реагент вводятся в
    систему на разных стадиях, что устраняет
    влияние различных эффекторов, содержащихся
    в образце, на каталитические свойства
    ферментной метки. Однако такая схема
    анализа усложняет его проведение из-за
    введения дополнительных стадий.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Псориаз
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: